Contribution à une étude phytothérapeutique, anti-inflammatoire et antioxydante du grenadier (Punica granatum L.) – Etude in vivo

Abstract

Résumé La présente étude contribue à la valorisation d'une plante médicinale appartenant à la famille des Lythraceae, Punica granatum L. Le grenadier possède une vaste histoire ethnomédicale et représente un réservoir phytochimique de valeur médicinale heuristique. Cependant, cette plante compte parmi les plantes médicinales le moins fréquemment utilisées dans notre pays en raison de l'ignorance de sa valeur thérapeutique. C’est dans ce but que nous nous sommes intéressés à la valorisation d’une variété locale et à l’évaluation de ses propriétés chimiques et biologiques à savoir : l'activité anti-inflammatoire et antioxydante des extraits d’écorces et du jus de grenade. Le criblage phytochimique des extraits a permis de mettre en évidence la présence des principaux métabolites secondaires. Ceci a été confirmé par une analyse quantitative basée sur le dosage des polyphénols totaux, des flavonoïdes, des tanins hydrolysables /condensés, des anthocyanes et des proanthocyanidines. Une considérable activité antioxydante des extraits (méthanolique et aqueux) et du jus a été révélé par l’utilisant de trois méthodes; le piégeage du radical libre DPPH, la réduction du fer ferrique et le blanchiment du β-carotène. Le jus de grenade a exprimé une valeur de la IC50 de l’ordre de 0.0012mg/ml, qui est inférieur à celle de l’acide ascorbique (0.013mg/ml). Le même extrait a exprimé un fort pouvoir réducteur avec une valeur de la IC50 de l’ordre de 0.095 mg/ml, qui est comparable à celle de l’acide ascorbique (0.075mg/ml). Les résultats obtenus démontrent que ces extraits possèdent une forte activité antioxydante et une forte capacité d’inhiber la peroxydation lipidique. L’application des extraits comme, anti-inflammatoire aux doses 250 et 500mg/kg, a montré une inhibition hautement significative de l’œdème des pattes des souris, d’une manière dose dépendante après 6h de l’injection de la carraghénine. Ces résultats ont été confirmés par l'étude histologique, montrant ainsi la présence d'un infiltrat inflammatoire moins intense par rapport au groupe témoin où l'inflammation était plus prononcée prouvant ainsi que la carraghénine a bel et bien induit une réaction inflammatoire. L’activité antioxydante a été confirmée in vivo, en étudiant l’effet des extraits contre la toxicité induite par le tétrachlorure de carbone (CCl4) chez les rats. Les extraits de grenade se sont avérés être hépatoprotecteurs contre les lésions hépatiques induites par le CCl4. En conclusion, la présente étude révèle une preuve biologique qui soutient l'utilisation du fruit du grenadier comme antioxydant, anti-inflammatoire et hépatoprotecteur. Mots clés : Punica granatum L., extraits, polyphénols, activité anti-inflammatoire, activité antioxydante, in vivo. Abstract This study contributes to the valorisation of a medicinal plant belonging to the Lythraceae family, Punica granatum L. Pomegranate tree possesses a vast ethnomedical history and represents a phytochemical reservoir of heuristic medicinal value. However, this plant is among the least frequently used medicinal plants in our country due to ignorance of its therapeutic value. It is for this purpose that we are interested in the valorization of a local variety and in the evaluation of its chemical and biological properties namely: Anti-inflammatory and antioxidant activity of peel extracts and pomegranate juice. The phytochemical screening of the extracts allowed showing the presence of the principal secondary metabolites. This was confirmed by a quantitative analysis based on the determination of total polyphenols, flavonoids, hydrolyzable / condensed tanins, anthocyanins and proanthocyanidins. Considerable antioxidant activity of the extracts (methanolic and aqueous) and juice was revealed by using three methods; DPPH free radical scavenging, ferric reducing power and β-carotene bleaching. Pomegranate juice expressed an IC50 of about 0.0012 mg/ml, which is lower than that of the ascorbic acid (0.013 mg /ml). The same extract expressed strong reducing power with an IC50 of about 0.095 mg / ml, which is comparable to that of the ascorbic acid (0.075 mg / ml). The results obtained demonstrate that these extracts have a high antioxidant activity and a strong ability to inhibit lipid peroxidation. Applying the extracts as anti-inflammatory at doses 250 and 500mg/kg, showed a highly significant inhibition of mouse paw edema, in a dose-dependent manner after 6h of carrageenan injection. These results were confirmed by the histological study, thus showing the presence of a less intense inflammatory infiltrate compared to the control group where the inflammation was more pronounced thus proving that carrageenan did induce an inflammatory reaction. Antioxidant activity was confirmed in vivo by studying the effect of extracts against carbon tetrachloride (CCl4) induced toxicity in rats. Pomegranate extracts have been shown to be hepatoprotective against CCl4-induced liver injury. In conclusion, the present study reveals biological evidence that supports the use of pomegranate fruit as an antioxidant, anti-inflammatory and hepatoprotector. Key words: Punica granatum L., extracts, polyphenols, anti-inflammatory activity, antioxidant activity, in vivo. ملخص هذه الدراسة تساهم في تثمين نبات طبي ينتمي إلى عائلةLythraceae ،Punica granatum L. ، لشجرة الرمان تاريخ عرقي طبي شاسع حيث أنها تحتوي على خزان كيميائي نباتي ذو قيمة طبية كبيرة، إلا أن هذه النبتة تعتبر من بين النباتات الطبية الأقل استعمالا في بلادنا بسبب جهل قيمتها العلاجية. لهذا الغرض نحن مهتمون بتثمين النوع المحلي وتقييم خصائصه الكيميائية والبيولوجية التي تتمثل في النشاط المضاد للإلتهابات والمضاد للأكسد لمستخلصات لحاء وعصير الرمان. الفرز الكيميائي للمستخلصات مكننا من تسليط الضوء على وجود نواتج الأيض الثانوية الرئيسية وهذا ما تم تأكيده من خلال التحليل الكمي القائم على تركيز إجمالي لمتعددات الپوليفينول، الفلافونويدات، التانينات المحللة والمركزة، الأنتوسيانات والپراوتوسيانيدات. تم اكتشاف نشاط معتبر مضاد للأكسدة للمستخلصات (الكحول المثالي والمائي) وعصير الرمان باستخدام ثلاث طرق: محاصرة الجذر الحر DPPH، الحد من الحديد وتبييض البيتاكاروتين. حيث أن قيمة ال IC50 (التركيز المثبط 50) لعصير الرمان قدرت بـ: 0,0012 مغ/مل وهي قيمة أقل من قيمة حمض الأسكوربيك (0,013 مغ/مل). أظهر نفس المستخلص قوة تخفيض عالية بقيمة IC50 قدرت بـ: 0,095 مغ/مل وهي تقارب قيمة حمض الأسكوربيك (0,075 مغ/مل). النتائج المحصل عليها تثبت أن لهذه المستخلصات نشاط مضاد للأكسدة ذو نسبة عالية وقدرة كبيرة على تثبيط دهون الپيروكسيد. استعمال المستخلصات كمضادات للإلتهاب بجرعات 250 و500 مغ/كغ أظهر تثبيط معتبر لذومة كفوف الفئران بشكل جرعة-معتمدة بعد 6 ساعات من حقن الكراجينين. تم التأكد من هذه النتائج من خلال دراسة الأنسجة مما يدل على وجود تسلل للإلتهابات بحدة أقل مقارنة بمجموعة الفئران الشاهدة أين كان الإلتهاب أكثر وضوحا وهذا ما يثبت أن الكراجينين قد أدى بالفعل إلى تفاعل إلتهابي .تم التأكد من فعالية النشاط المضاد للأكسدة in vivo من خلال دراسة تأثير المستخلصات ضد سمية رباعي كلوريد الكربون) (CCl4 عند الفئران وقد تبين أن مستخلصات الرمان لها خاصية حماية الكبد ضد CCl4 المسبب لتلف خلايا الكبد. نستنتج في الأخير أن هذه الدراسة أثبتت وجود دعم بيولوجي هام لثمرة الرمان باعتبارها مضادة للأكسدة، للإلتهاب وحامية للكبد.

الكلمات المفتاحية: Punica granatum L.، مستخلصات، الپوليفينول ، نشاط مضاد للإلتهاب ، نشاط مضاد للأكسدة ، in vivo.