Effet antagoniste des bactéries lactiques isolées à partir du lait de vache vis-à-vis de Salmonella sp

Abstract

Résumé : Cette étude porte sur les effets bénéfiques des microorganismes dénommés probiotiques à savoir : Lactococcus sp, Lactobacillus sp et Leuconostoc sp, des souches lactiques isolées à partir du lait cru de vache et Lactococcus lactis subsp lactis CNRZ 1427 une souche de référence, et proposer les différentes possibilités thérapeutiques non antibiotiques vis-à-vis de l’agent pathogène Salmonella sp. Nous avons réalisé un test In vivo où nous avons remarqué qu’un traitement en présence de ces souches lactiques est efficace car il provoque une diminution importante du germe pathogène étudié dans les crottes, intestin et estomac. L’efficacité de ces souches lactiques a été confirmée par des tests de résistance aux conditions digestifs (pH, sels biliaires, les enzymes digestives). La recherche de la substance antagoniste a été réalisée suivant la méthode de diffusion sur gélose. Une caractérisation de l’agent inhibiteur a été réalisée après élimination de l’effet des acides organiques (neutralisation du milieu à pH 7) et un effet de l’enzyme pepsine et trypsine ainsi qu’un test de stabilité à température 100°C pendant 75min. Les cinq souches lactiques ont données des zones d’inhibition à l’égard de la souche cible Salmonella sp. Les substances inhibitrices produites perdent leurs activités après traitement par la pepsine, trypsine et à pH : 2.5, 4.3, 6.5. Ensuite, une extraction des peptides bioactifs par la méthode de précipitation au sulfate d’ammonium et la méthode d’Adsorption-Désorption. Les extraits ont été caractérisés par une analyse à l’UV-Visible, IR et HPLC. Enfin, notre travail s’achève avec la détermination des CMI et CMB des extraits des souches modèles. Mots clés : Lactococcus sp, Salmonella sp, Bactériocine, Adsorption-Désorption, Précipitation au sulfate d’ammonium.. Abstract : This study examined the beneficial effects of microorganisms called probiotics: Lactococcus sp, Lactobacillus sp and Leuconostoc sp, lactic strains isolated from raw cow's milk and a reference strain Lactococcus lactis subsp lactis CNRZ 1427; and proposed the different therapeutic possibilities antibiotics, with respect to the pathogen Salmonella sp. An in vivo test was performed where it was observed that treatment in the presence of these lactic strains is effective because it causes a remarkable decrease of this pathogenic organism studied in the droppings, intestine and stomach. The efficacy of these lactic strains was confirmed by tests of resistance to digestive conditions (pH, bile salts, and digestive enzyme). The search for the antagonist substance was carried out according to the agar diffusion method. A characterization of the inhibiting agent was carried out after removal of the effect of organic acids (neutralization of the medium at pH 7) and an effect of the enzyme pepsin and trypsin thus a stability test at 100°C temperature for 75 min. The five strains gave zones of inhibition against the target strain Salmonella sp. The inhibitory substances produced lose their activities after treatment with pepsin, trypsin and at pH: 2.5, 4.3, 6.5. Then, extraction of the bioactive peptides by the method of ammonium sulfate precipitation and Adsorption-Desorption method. The extracts were characterized by UV-Visible, IR and HPLC analysis. Finally, our work ends with the determination of MICs of the extracts of the model strains. Key words: Lactococcus sp, Salmonella sp, Bacteriocin, Adsorption-Desorption, Ammonium Sulphate Precipitation.. ملخص: بحثت هذه الدراسة الآثار المفيدة من الكائنات الحية الدقيقة بروبيوتيك وهي Lactococcus sp, Lactobacillus sp Leuconostoc sp, سلالات معزولة من حليب البقر الخام وسلالة مرجعية Lactococcus lactis subsp lactis CNRZ 1427 واقتراح إمكانيات علاجية مختلفة من غير المضادات الحيوية ضد السالمونيلا . حققنا الاختبار في جسم حي ) الفئران ( حيث لاحظنا أن العلاج في وجود هذه السلالات اللاكتيك فعالة لأنه يسبب انخفاضا كبيرا في العوامل المسببة للأمراض في الأمعاء والمعدة . تم تأكيد فعالية سلالات اللاكتيك من اختبارات التحمل لظروف الجهاز الهضمي ) pH ، الأملاح الصفراوية والأنزيمات الهاضمة ( البحث عن المادة الخصم أجريت وفقا لطريقة النشرعلى الأجار تم إجراء توصيف المادة الخصم بعد إزالة تأثير الأحماض العضوية )في درجة الحموضة 7 ( وتأثير انزيم البيبسين و التربسين و اختبار استقرار في درجة حرارة 100 درجة مئوية لمدة 75 دقيقة . السلالات الخمس أعطت تثبيط ضد السالمونيلا . المواد المثبطة المنتجة تفقد أنشطتها بعد العلاج مع البيبسين، التربسين ودرجة الحموضة: 2.5 ، 4.3 ، 6.5. وأخيرا، ينتهي عملنا مع تقريرالتركيز المثبط الأدنى للمواد المنتجة للسلالات الخمس . ثم، استخراج الببتيدات النشطة من خلال طريقة précipitation au sulfate d'ammonium وطريقة Adsorption - .Désorption ثم تحليل الببتيدات النشطة المستخرجة عن طريق الأشعة فوق البنفسجية مرئي، - الأشعة تحت الحمراء و HPLC الكلمات المفتاحية : مبيد جرثومي , Lactococcus sp, Salmonella sp, Adsorption-Désorption,. طريقة précipitation au sulfate d'ammonium