Staphylococcus à coagulase négative isolés au Centre Anti-Cancer de Batna: étude bactériologique, profil de sensibilité aux antibiotiques, formation de biofilm et thérapie antistaphylococcique

Abstract

lase Négative (SCN) sont actuellement reconnus comme agents pathogènes opportunistes possédants de multiples propriétés de résistance aux antibiotiques et de formation de biofilms ce qui peut augmenter leur virulence. Dans le cadre de cette thèse, nous avons procédé premièrement à l’isolement des SCN cliniques des différents services du Centre Anti-Cancer (CAC) de Batna (Algérie) puis à l’évaluation de leur résistance aux antibiotiques et à l’étude de leur formation de biofilms. Au total 66 SCN ont été isolés et leur formation de biofilm a été évaluée par la méthode de culture de tissu en plaque (TCP) et la méthode de Rouge Congo Agar (RCA). Après, nous avons détecté la présence des gènes mecA et icaAD dans les génomes de quelques SCN. Une étude de l’effet antistaphylococcique de quelques Pseudomonas fluorescents a été réalisée. 29 isolats de Pseudomonas ont été isolés à partir des racines d'une plante graminée sauvage (l’orge du rat = Hordeum murinum) pour les utiliser dans l’inhibition de 20 isolats de SCN en utilisant la méthode des stries croisés. Les surnageants des cultures des Pseudomonas dans le milieu MHB ont été aussi testés. L’isolat de Pseudomonas fluorescens PK le plus performant dans l’inhibition des SCN a été utilisé pour la production des composés phénaziniques. Il a été inoculé dans le milieu NBY liquide puis une extraction par le solvant d'acétate d'éthyle a été effectuée. Le composé obtenu à sec à été utilisé contre les isolats de SCN. Une autre approche a été également menée et consiste en une étude de l’effet des huiles essentielles et des extraits méthanoliques de quelques plantes récoltées de la région des Aures (Juniperus oxycedrus L., Juniperus thurifera L., Salvia officinalis L. et Thymus ciliatus ssp. munbyanus (Boiss. & Reut.) Batt. sur la croissance des SCN et leur formation des biofilms. La compostion chimique des huiles essentielles des plantes étudiées a été déterminée par la CG-SM. Les résultats obtenus ont montré une diversité des SCN. Neuf espèces ont été obtenues dont 44% isolées principalement du service d’onco-hématologie sont rapprochées à Staphylococcus epidermidis. Presque tous les isolats étaient résistants à la pénicilline G (98.5%), et la majorité ont montré une résistance à la céfoxitine (80.3%) et à l'oxacilline (72.2%). La méthode TCP était plus sensible (89.4%) que la méthode RCA (31.8%) dans la détection de la formation des biofilms. Le gène mecA a été détecté dans 66.7% (6/9) isolats des SCN résistants à la céfoxitine et le gène icaAD dans 55.6% (5/9) isolats positifs des SCN sur RCA. Les 29 isolats de Pseudomonas ont inhibé 19 sur 20 SCN. L'isolat le plus performant P. fluorescens PK a inhibé 14 isolats de SCN avec des zones d'inhibition allant de 12 mm à 55 mm. Le composé phénazinique extrait à sec a montré une efficacité contre 13 isolats de staphylocoques avec des zones d'inhibition allant de 6.75 à 27.33 mm. L'analyse du composé par les spectrophotomètres UV-visible et infrarouge ont montré des caractéristiques qui font rapprocher le composé obtenu aux hydroxyphénazines. Les résultats de l’analyse de la compostion chimique par CG-SM des HE montrent la richèsse et la diversité des huiles essentielles des plantes étudiées dont la plante la plus active T. ciliatus ssp. munbyanus qui contient 32 composés identifiés parmi lesquels le thymol (69%). Les résultats d’analyse des EM des plantes étudiées par HPLC montrent une variabilité de leur composition. L’huile essentielle et l’extrait méthanolique de T. ciliatus ssp. munbyanus par rapport à ceux des autres plantes étudiées ont montré une bonne activité inhibitrice sur les isolats de SCN avec des diamètres moyens d’inhibition de 24.99 mm et 15.76 mm respectivement. Les SCN ont été plus sensibles à l’huile essentielle de T. ciliatus ssp. munbyanus avec des valeurs de CMI et CMB égales à 2.65 mg/ml et 5.31 mg/ml respectivement. L'activité antibiofilm de l’HE et de l’EM de cette dernière plante est appréciable pour l'HE et l'EM avec un pourcentage de 65.63 % et 58.08 % respectivement suivie par l'HE et l'EM de S. officinalis avec 53.13 % et 49.72 % respectivement.